Jsem odborníkem ve smyslu §2a Zákona č. 40/1995 Sb., o regulaci reklamy, ve znění pozdějších předpisů, čili jsem osobou oprávněnou léčivé přípravky, zdravotnické prostředky nebo diagnostické zdravotnické prostředky in vitro předepisovat nebo vydávat anebo poskytovat zdravotní služby, nebo jsem zaměstnancem poskytovatele zdravotních služeb.
Před vstupem do článku je nutné potvrdit seznámení se s oběma riziky.
101 kroků: Napínání řezů
Krok 37: Používat čistou vodu
Voda ve vodní lázni pro napínání řezů je pravidelně vyměňována.
Voda ve vodní lázni pro napínání řezů je pravidelně doplňována, ale vyměňována jen příležitostně. To může vést k její kontaminaci plísněmi apod., které pak mohou přilnout na řez nebo podložní sklo.
Obr: Řez serózy části GIT v přehledném barvení (H&E). Shluky slabě se barvících mikroorganismů jsou přítomny uvnitř tkáně. Jsou ale také vidět mimo řez. Pravděpodobným zdrojem těchto kontaminujících organismů byla vodní lázeň pro napínání řezů.
Krok 38: Zajistit čistotu podložních skel
Před použitím podložních skel je vždy třeba ověřit jejich čistotu. Manipulace s nimi by však měla být minimalizována, aby nedošlo k jejich kontaminaci kožními buňkami.
Čistota podložních skel není vůbec ověřována, což se může projevit na výsledku práce.
Obr: A) Tento řez ledvin byl znehodnocen černým pigmentem, který ulpěl na skle před použitím. Pigment se objevil i pod řezem na dalších částech skla. B) Řez tkáně plic obsahující louže obarveného tkáňového adheziva. Adhezivum (mohlo být na bázi želatiny) bylo buď součástí lázně na napínání řezů. Bílkoviny v adhezivu se po odpaření vody koncentrovaly. Pro odstranění tohoto problému je třeba před sušením odstranit co nejvíce vody pod řezem.
Krok 39: Zamezit křížové kontaminaci vzorků
Mezi krájením různých bloků je voda dobře vyčištěna od zbytků řezů z předchozího bloku.
Mezi krájením různých bloků není voda dobře vyčištěna od zbytků řezů z předchozího bloku a dochází ke křížové kontaminaci, která může vést ke zmatkům či dokonce i k nepřesné diagnóze.
Obr: Řez srdečního svalu kontaminovaného fragmentem štítné žlázy z jiného vzorku. Příklad kontaminace vznikl ve vodní lázni.
Krok 40: Zamezit kontaminaci kožními buňkami
Aby nedošlo ke kontaminaci vzorků kožními buňkami, při práci je třeba se vyvarovat česání vlasů a mnutí rukou.
„Někteří laboranti kontaminují skla jejich kožními buňkami více než jiní. Zřejmě nevědí, jak se tomu dá zabránit.“
Obr: Řez ledviny, obsahující velké množství kožních buněk. Když přilnou k řezu během napínání, drží se na povrchu velmi pevně. Zde se barví eozinem.
Krok 41: Nepracovat s více bločky současně
Při napínání nikdy nepracujeme s více bločky současně.
Při práci s řezy z více bloků současně hrozí nepřesná identifikace vzorků, zejména pokud jsou vzorky stejné.
Obr: Obrázek ukazuje dva současně nakrájené bloky. Tato praxe může způsobit zmatek a vést k nepřesné identifikaci a chybnému natažení řezů.
Krok 42: Kontrolovat teplotu vody v lázni
Teplota vody v napínací lázni by měla mít o 5-10°C méně, než je bod tání parafínu. Řezy se díky tomu snadno vyrovnají a parafín ještě nebude tát.
Pokud napínání v lázni trvá déle než 15 sekund, hrozí roztavení vosku a s ním i poškození integrity tkáně.
Obr: Tyto řezy kůže jsou potrhané v důsledku napínání na příliš teplé vodě. Nejnáchylnější k tomuto problému jsou špatně zpracované tkáně.
Krok 43: Zamezit shrnutí řezů
Řezy se v napínací lázni snadno vyrovnají.
Nedochází k napnutí správně ukrojených řezů a řezy jsou shrnuté. Mírné zvýšení teploty vody v lázni by tento problém mohlo vyřešit.
Obr: V tomto případě se shrnuté řezy nenapnuly. Pečlivější krájení a mírně teplejší voda by tento problém překonaly.
Krok 44: Vyvarovat se nadměrné expanze řezů
Řezy jsou na vodní hladině v lázni ponechány jen do té doby, než dojde k jejich napnutí. Poté jsou ihned přeneseny na podložní sklo.
Z pohodlnosti jsou řezy v lázni ponechány delší dobu, což může způsobit jejich roztrhání a může vést k poškození tkáně, zejména jemných vzorků, např. lymfatické tkáně.
Obr.: A) Řez vzorku střevní sliznice v barvení PAS ukazuje lamina propria, která je nadměrně roztažená – žlázky jsou oddělené od vaziva. Tento příklad způsobila příliš horká napínací lázeň. B) Část lymfatické tkáně, která praskla v důsledku nadměrného vypnutí ve vodní lázni. Lymfoidní a hematopoetické tkáně jsou obzvláště náchylné k poškození při procesu napínání.
Krok 45: Při napínání řezy nepoškodit
Při napínání je dbána nejvyšší opatrnost, pokud je z řezu potřeba mechanicky odstranit shrnutí. Pomoct si lze štětečkem, pinzetou nebo háčkem.
Při narovnávání řezů na vodní hladině není brán zřetel na jemnost tkání a záhyby a shrnutí jsou odstraňovány nešetrně. Poškození může být makroskopické nebo jen mikroskopické.
Obr.: Řez srdečního svalu ukazuje mechanické poškození způsobené při pokusu o odstranění záhybu v řezu (srdce, H&E).
Krok 46: Řezy pečlivě vybírat
První nebo druhý řez nejsou použity, protože vychlazený blok se průchodem čepele zahřívá a dochází k tepelné expanzi parafínu. Teprve po několikerém projetí žiletky přes blok se teploty vyrovnají a lze ukrojit kvalitní řez.
První nebo druhý řez jsou použity, protože vypadají nejlépe.
Obr.: Série řezů z bloku očíslovaná v pořadí od ukrojení. Všimněte si, že první dva řezy jsou nejširší. S delší dobou krájení a zahříváním bloku řezy se více krabatí. Přestože mikrotom byl nastaven na 3μm, byla tloušťka prvních dvou řezů 4-5 μm z důvodu tepelné expanze parafínu.
Krok 47: Zamezit vzniku bublin pod řezem
Bublinky, vznikající ve vodní lázni zahříváním vody musí být odstraněny před položením řezu na hladinu vodní lázně.
Bublinky jsou v lázni ignorovány a při položení řezu na hladinu se pod ním zachytí. Předpokládá se, že bubliny zmizí během sušení řezu na skle. Po vyschnutí řezu se v místech bublin řez roztrhá.
Obr.: Řez jater obarvený H&E, ukazující kruhovou, popraskanou oblast, kde se řez nadzvedl. Příčinou byla právě bublina z napínací lázně, která ulpěla zespoda řezu a zabránila přilnutí řezu ke sklu.
Krok 48: Zvýšit přilnavost řezů
Použitím kvalitních skel, např. nabitých nebo potahovaných skel.
Někdy mají řezy tendenci uplavat ze skla, zejména při vaření u imunohistochemických metod nebo histologických metod, vyžadujících zahřívání skel. Potom je třeba použít potahovaná skla.
Obr.: Oblast tkáně plic, která se při barvení nadzvedla a přeložila se na vedlejší úsek tkáně (H&E).
Voda ve vodní lázni pro napínání řezů je pravidelně vyměňována.
Voda ve vodní lázni pro napínání řezů je pravidelně doplňována, ale vyměňována jen příležitostně. To může vést k její kontaminaci plísněmi apod., které pak mohou přilnout na řez nebo podložní sklo.
