Jsem odborníkem ve smyslu §2a Zákona č. 40/1995 Sb., o regulaci reklamy, ve znění pozdějších předpisů, čili jsem osobou oprávněnou léčivé přípravky, zdravotnické prostředky nebo diagnostické zdravotnické prostředky in vitro předepisovat nebo vydávat anebo poskytovat zdravotní služby, nebo jsem zaměstnancem poskytovatele zdravotních služeb.
Před vstupem do článku je nutné potvrdit seznámení se s oběma riziky.
101 kroků: Zpracování ve tkáňovém automatu
Krok 20: Správný program
Je třeba mít program vhodný pro tkáň konkrétního typu i velikosti.
Nevhodně zvolený program, např. velmi dlouhý program pro malý endoskopický vzorek nebo naopak velmi krátký program pro velký vzorek tukové tkáně prsu.
Obr: A) Endoskopická biopsie byla neúměrně dlouhou dobu v technikonu a stala se velmi křehkou. V důsledku toho je v celém řezu vidět mnoho jemných trhlin. Špatná technika krájení ještě tento problém zhorší (H&E). B)Tato fotografie malého místa podkožní tkáně z velkého tukového vzorku ukazuje účinky nedostatečného zpracování v technikonu. Vazivová i tuková tkáň jsou špatně prosycené a tudíž fragmentované, zatímco epiteliální tkáně žláz vykazují nedostatečně ohraničená jádra a zvláštní barvení v důsledku zadržovaného rozpouštědla (H&E).
Krok 21: Následná fixace
Pro optimální zpracování a dobrou morfologii by tkáň měla být dobře fixována (ihned po odběru a dostatečně dlouho). Pokud tomu tak není, fixace by měla být zopakována.
U neúplně fixovaných vzorků lze pozorovat zónovou fixaci, kdy vnější části vzorku jsou fixovány formolem, zatímco hlubší oblasti zafixoval alkohol, který tkáň dofixuje v případě nedostatečné formolové fixace. Alkohol maskuje některé imunohistochemické reakce a ty nemusí dávat specifické výsledky.
Obr: A) Účinky zónové fixace na řezu kostní dřeně (H&E). V horní levé části jsou erytrocyty neporušené, zatímco v dolní části jsou hemolyzované. B)Malé zvětšení vzorku jater barvených trichromem. Zbarvení vnější části vzorku se liší od vnitřní části.
Krok 22: Udržovat kvalitu roztoků a parafínu
Při výběru činidel se řídit zavedenými směrnicemi, případně k tomu využívat systém řízení roztoků v tkáňových automatech, jako je třeba PelorisTM od Leica Microsystems.
Směrnice či systémy řízení činidel v tkáňových automatech, jsou ignorovány. To může vést k tomu, že jsou používána neúčinná, kontaminovaná nebo ředěná činidla, výsledkem čehož může být špatná kvalita zpracování.
Obr: V řezu velkého vzorku kůže – špatné zachování denzního kolagenu je způsobeno nedostatečným prosycením. V tomto případě šlo pravděpodobně o použití kontaminovaných roztoků.
Krok 23: Používat vysoce kvalitní parafín
K infiltraci a zalévání je používán vysoce kvalitní parafín, což vede ke snadnému krájení bloků.
K prosycení a zalévání je používán levný a méně kvalitní parafín z málo známých zdrojů, což vede k problémům při krájení bloků.
Obr: Z tohoto vychlazeného bloku byla pomalu nakrájena série řezů. Řezy vykazují značné stlačení, které není při krájení vychlazených bloků obvyklé. Zde stlačení vzniklo z důvodu použití nekvalitního parafínu, který neprosytil dostatečně tkáň.
Krok 24: Vyhýbat se nebezpečným činidlům
Pokud je to možné, vyhýbat se zdraví škodlivým činidlům na bázi xylenu.
Škodlivost činidel na bázi xylenu není vůbec brána v potaz.
Obr: Bezxylenové zpracování může zlepšit chemickou bezpečnost provozu laboratoře, aniž by došlo k narušení kvality zpracování vzorků.
Je třeba mít program vhodný pro tkáň konkrétního typu i velikosti.
Nevhodně zvolený program, např. velmi dlouhý program pro malý endoskopický vzorek nebo naopak velmi krátký program pro velký vzorek tukové tkáně prsu.
