1. Vyberte primární protilátku

⯈ Specifickou pro váš antigen

⯈ Zvažte druh tkáně a její přípravu (fixaci)

⯈ Zvažte požadavky na odmaskování antigenu

Blokovací činidla

⯈ Volby určené variantami vybranými v krocích 1-2

⯈ Streptavidin/biotin blokovací kit

⯈ (pokud používáte biotin/streptavidinový systém)

⯈ Avidin/biotin blokovací kit

⯈ Normalní sérum (z druhu sekundární protilátky)

⯈ M.O.M. (Myš na myš) blokovací činidlo

⯈ R.T.U. Animal-Free blokovací činidlo a ředidlo

⯈ BSA

⯈Roztok kaseinu

2. Vyberte sekundární protilátku a terciální detekční systém

⯈ Vyberte fluorofor na základě vlnových délek filtrů v mikroskopu

⯈ Fluorofor-konjugovaná sekundární protilátka nebo biotinylovaná sekundární protilátka

⯈ Zvažte požadavky na citlivost

⯈ Zvažte druh primární protilátky

⯈ Zvažte druh tkáně

Varianta A

Jeden krok
⯈ Jedna-značka. Rychlé. Výhodné.

⯈ Fluoroforem konjugované sekundární protilátky

⯈ VectaFluor R.T.U. DyLight značené sekundární protilátky

Varianta B

Jeden krok
Duální-značení, detekce dvou antigenů.
Rychlé. Výhodné.

⯈ VectaFluor Duet IF kity pro dvojité značení

Varianta C

Dva kroky

⯈ Založené na biotinu.

⯈ Biotinylovaná sekundární protilátka a fluorofor konjugovaný s avidinem nebo streptavidinem.

⯈ Viz krok 3 pro dodatečné zesílení

Varianta D

Dva kroky

⯈ Nejvyšší citlivost. Není založen na biotinu.

⯈ VectaFluor Excel Amplifikovaný fluorescenční barvicí systém (amplifikační linker + fluorescenční terciální protilátka)

3. Zvolte zesílení signálu pomocí systémů na bázi
Biotinu (Krok 2, varianta C)

⯈ Se systémy založenými na biotinu je možno provést více kroků amplifikace

4. Snížení autofluorescence způsobené fixací aldehydy

⯈ TrueVIEW kity zhášející autofluorescenci s kontrastním barvením DAPI či bez něj

5. Vyberte montovací medium s nebo bez kontrastního barvení

⯈ VECTASHIELD Antifade montovací medium, s kontrastním barvením jader nebo bez něj

6. Vizualizace

⯈ Fluorescenční mikroskop

⯈ Prohlížejte pomocí vhodných excitačních/emisních filtrů