Průvodce řešením problémů pro qPCR
| Problém | Možné řešení |
| Nízká nebo žádná fluorescence nebo vysoká hodnota Ct | • Pokud používáte sondu, může být nekompatibilní, špatně syntetizovaná nebo degradovaná. Zkuste použít různé sondy. • Ověřte, že údaje o fluorescenci jsou shromažďovány ve správném kroku • Postupně prodlužujte dobu nasedání primerů • Postupně snižujte teplotu nasedání primerů • Postupně prodlužujte dobu elongace • Velikost amplikonu by neměla přesáhnout 250 bp • Zvyšte množství templátu • Ujistěte se, že vzorek templátu neobsahuje inhibitory • Znovu purifikujte templát nebo ho rozřeďte • Zkontrolujte, zda používáte správné barvivo kompatibilní s vaší qPCR platformou („ROX“ nebo „bez ROX“) • Navyšte počet PCR cyklů • Ujistěte se, že je přístroj správně nastaven pro váš experiment |
| Přítomnost fluorescenčního signálu v negativní kontrole (bez templátu) | • Pravděpodobně se jedná o problém kontaminace. Postupujte podle obecných pokynů, abyste kontaminaci zabránili. |
| Nespecifická amplifikace | • Postupně zvyšujte teplotu nasedání primerů. • Dávejte pozor na dimery primerů. V případě potřeby upravte primery |
podobné články
Jak stanovovat cytokiny
V roce 1957 studovali Alick lsaacs a Jean Lindenmann vliv tepelně inaktivovaného viru chřipky na růst živého viru ve fragmentech kuřecí chorionické chorioallantoické membrány a zjistili, že tepelně inaktivovaný chřipkový virus inkubovaný s membránami produkoval látku, která narušovala infekci a replikaci živého viru.
více informací
5 tipů pro lepší počítání buněk
Počítání buněk je únavná práce, kterou je potřeba dělat řádně, ať už v průmyslu nebo na akademické půdě, ať už ručně nebo automatizovaně. Ve všech případech potřebujete obdržet důvěryhodné výsledky, abyste mohli dále pokračovat ve své práci.
více informací
Úvod do světelné mikroskopie se širokým zorným polem
Tento článek má za cíl vysvětlit rozdíly mezi mikroskopem se širokým zorným polem (WF) a konfokálním mikroskopem, zejména pak rozdíly mezi zobrazováním a osvětlením mezi oběma těmito systémy. Rovněž se článek zabývá konfigurací mikroskopů se širokým zorným polem, konkrétně použitých světelných drah a problémy se světlem mimo rovinu zaostření.
více informací