Průvodce řešením problémů pro qPCR
| Problém | Možné řešení |
| Nízká nebo žádná fluorescence nebo vysoká hodnota Ct | • Pokud používáte sondu, může být nekompatibilní, špatně syntetizovaná nebo degradovaná. Zkuste použít různé sondy. • Ověřte, že údaje o fluorescenci jsou shromažďovány ve správném kroku • Postupně prodlužujte dobu nasedání primerů • Postupně snižujte teplotu nasedání primerů • Postupně prodlužujte dobu elongace • Velikost amplikonu by neměla přesáhnout 250 bp • Zvyšte množství templátu • Ujistěte se, že vzorek templátu neobsahuje inhibitory • Znovu purifikujte templát nebo ho rozřeďte • Zkontrolujte, zda používáte správné barvivo kompatibilní s vaší qPCR platformou („ROX“ nebo „bez ROX“) • Navyšte počet PCR cyklů • Ujistěte se, že je přístroj správně nastaven pro váš experiment |
| Přítomnost fluorescenčního signálu v negativní kontrole (bez templátu) | • Pravděpodobně se jedná o problém kontaminace. Postupujte podle obecných pokynů, abyste kontaminaci zabránili. |
| Nespecifická amplifikace | • Postupně zvyšujte teplotu nasedání primerů. • Dávejte pozor na dimery primerů. V případě potřeby upravte primery |
podobné články
Jak čistit optiku mikroskopu
Čistá optika mikroskopu je pro získání dobrého obrazu nezbytná. Pokud se rozhodnete čistit mikroskop sami, měli byste být velmi opatrní, abyste nepoškodili citlivou optiku mikroskopu.
více informací
Dosáhněte přesnějších výsledků při stanovení proteinů pomocí ELISA
Rádi bychom vás touto cestou upozornili, že u nás lze nyní pořídit ELISA kity výrobců Cloud-Clone a RayBiotech za zvýhodněnou cenu.
více informací
Imerzní objektivy: Použití oleje, glycerolu nebo vody pro překonání určitých mezí rozlišení
Při zkoumání vzorků při vysokém zvětšení pomocí mikroskopu je třeba vzít v úvahu řadu faktorů. Patří mezi ně rozlišení, numerická apertura (NA), pracovní vzdálenost objektivů a index lomu média, kterým je obraz shromažďován čočkou objektivu.
více informací