Průvodce řešením problémů pro qPCR

vytvořeno: 30.10.2019

Průvodce řešením problémů pro qPCR

Problém Možné řešení
Nízká nebo žádná fluorescence nebo vysoká hodnota Ct Pokud používáte sondu, může být nekompatibilní, špatně syntetizovaná nebo degradovaná. Zkuste použít různé sondy.

Ověřte, že údaje o fluorescenci jsou shromažďovány ve správném kroku

Postupně prodlužujte dobu nasedání primerů

Postupně snižujte teplotu nasedání primerů

Postupně prodlužujte dobu elongace

Velikost amplikonu by neměla přesáhnout 250 bp

Zvyšte množství templátu

Ujistěte se, že vzorek templátu neobsahuje inhibitory

Znovu purifikujte templát nebo ho rozřeďte

Zkontrolujte, zda používáte správné barvivo kompatibilní s vaší qPCR platformou („ROX“ nebo „bez ROX“)

Navyšte počet PCR cyklů

Ujistěte se, že je přístroj správně nastaven pro váš experiment

Přítomnost fluorescenčního signálu v negativní kontrole (bez templátu) Pravděpodobně se jedná o problém kontaminace. Postupujte podle obecných pokynů, abyste kontaminaci zabránili.
Nespecifická amplifikace Postupně zvyšujte teplotu nasedání primerů.

Dávejte pozor na dimery primerů. V případě potřeby upravte primery

 

Incucyte® – Využijte analýzu živých buněk uvnitř vašeho inkubátoru

Incucyte® – Využijte analýzu živých buněk uvnitř vašeho inkubátoru

Seznamte se s platformou Incucyte společnosti Sartorius a zjistěte, ve které variantě by byl nejvhodnější pro Vaši laboratoř!

více informací
Workshop a prezentace přístrojů Sartorius – Praha a Hradec Králové

Workshop a prezentace přístrojů Sartorius – Praha a Hradec Králové

Srdečně Vás zveme na workshop a prezentaci Sartorius Octet N1 v pondělí 7.11.2022 v Hradci Králové a workshop a prezentaci Incucyte a Octet ve středu 9.11.2022 v Praze.

více informací
Představujeme Corning® Lambda™ EliteMax, poloautomatický stolní pipetor

Představujeme Corning® Lambda™ EliteMax, poloautomatický stolní pipetor

Stolní pipetor Corning Lambda EliteMax Benchtop Pipettor je poloautomatický, cenově dostupný a snadno použitelný manipulátor kapalin pro laboratorní stoly, které jsou omezené na prostor, ale vyžadují výkon a schopnost provádět vysokokapacitní screeningy pro velké objemy testů. Více se dočtete v následujícím textu.

více informací